PENGUKURAN KAPASITAS ANTIOKSIDAN MENGGUNAKAN DPPH

DAN

PENGUKURAN TOTAL FENOL

Ashar Iskandar

 

ABSTRACT

The purposes of the research are to know the antioxidant capacity (activity) in food (tea) and to predict the total amount of antioxidant (total amount of phenol) in plant (tea). In antioxidant capacity measurement, the tea (green tea and black tea) used as liquid sample was reacted by DPPH (2,2-diphenyl-1-picrylhydrazil or 1,1-diphenyl-2-picrylhydrazil). Then, the absorbance of the sample was measured in wavelength of 517 nm. In total amount of phenol measurement, the liquid sample of tea was reacted by ethanol 95%, Folin Ciocalteau 50%, and Na₂CO₃ 5%. After that, the absorbance of this sample was measured in wavelength of 725 nm.

The result showed that the green tea has antioxidant capacity relatively higher than the black tea. This data was also confirmed by the result of the total amount of phenol in green tea which is higher than in black tea. It is affected by its making process that the green tea is not fermented as the black tea is.

I.        PENDAHULUAN

Antioksidan merupakan senyawa yang dapat menunda, memperlambat, dan mencegah terjadinya reaksi oksidasi radikal bebas dalam oksidasi lipid (Kochar dan Rossell, 1990). Berdasarkan sumbernya, antioksidan dibagi menjadi dua kelompok, yaitu antioksidan sintetik dan antioksidan alami. Antioksidan sintetik merupakan anitoksidan yang diperoleh dari hasil sintesis reaksi kimia, sedangkan antioksidan alami merupakan antioksidan yang diperoleh dari ekstraksi bahan alami.

Antioksidan memiliki peranan yang penting bagi kesehatan, yaitu dalam mengatasi implikasi reaksi oksidasi dalam tubuh yang dapat menyebabkan penyakit kardiovaskuler, kanker, dan penuaan (Nelson et al., 2003). Antioksidan alami dalam pangan dapat berasal dari satu atau lebih komponen pangan. Antioksidan alami, seperti yang terdapat pada teh, dapat menghambat terjadinya reaksi oksidasi dalam minyak jagung, minyak kacang, dan minyak ikan yang sangat rentan terhadap reaksi oksidasi karena mengandung asam lemak tidak jenuh yang tinggi.

Teh sebagian besar mengandung ikatan biokimia yang disebut polifenol. Polifenol merupakan suatu kelompok antioksidan yang secara alami terdapat pada sayur-sayuran, buah-buahan, dan minuman seperti teh dan anggur (Pambudi, 2004). Polifenol ini mempunyai kemampuan untuk menghambat reaksi oksidasi dan menangkap radikal bebas. Selain itu, polifenol juga mempunyai aktivitas sebagai antioksidan dan antiradikal (Burda dan Oleszek, 2001).

Dengan demikian, praktikum kali ini bertujuan untuk menentukan kapasitas antioksidan suatu senyawa pada teh (teh hijau dan teh hitam) dengan berbagai merek dan mengukur kadar total fenolik suatu bahan, terutama yang berasal dari tanaman (teh), yang merupakan salah satu parameter untuk mendapatkan perkiraan besarnya kapasitas antioksidan pada bahan tersebut. Oleh karena itu, data yang didapat dapat memberikan informasi aktivitas antioksidan pada teh hijau dan teh hitam

II.      BAHAN DAN METODE

A.      Alat dan Bahan

1.       Pengukuran Kapasitas Antioksidan Menggunakan DPPH

Alat-alat yang digunakan dalam praktikum Pengukuran Kapasitas Antioksidan Menggunakan DPPH ini, antara lain neraca analitik, gelas piala, gelas ukur, gelas pengaduk, kertas saring, labu takar, tabung reaksi bertutup, pipet mikro, pipet Mohr, vortex, kuvet, dan spektrofotometer. Bahan-bahan yang diperlukan untuk praktikum ini, yaitu sampel teh dari berbagai merek (bentuk bubuk, kasar, dan celup), seperti Teh Sariwangi (teh hitam), Teh Sariwangi Celup (teh hijau), Teh Kepala Jenggot (teh hitam), Teh Kepala Jenggot (teh hijau), Teh Sosro Celup (teh hitam), dan Teh Cap Botol (teh hitam), akuades mendidih, metanol, serta DPPH 1 mM dalam metanol (disiapkan segar).

2.       Pengukuran Total Fenol

Alat-alat yang digunakan dalam praktikum Pengukuran Total Fenol ini, antara lain tabung reaksi, gelas piala, pipet Mohr, vortex , kuvet, dan spektrofotometer. Bahan-bahan yang diperlukan untuk praktikum ini, yaitu sampel teh dari berbagai merek (bentuk bubuk, kasar, dan celup), seperti Teh Sariwangi (teh hitam), Teh Sariwangi Celup (teh hijau), Teh Kepala Jenggot (teh hitam), Teh Kepala Jenggot (teh hijau), Teh Sosro Celup (teh hitam), dan Teh Cap Botol (teh hitam), etanol 95%, akuades, reagen Folin Ciocalteau 50%, Na₂CO₃ 5%, dan larutan standar asam galat.

B.      Metode (Prosedur Praktikum)

1.       Pengukuran Kapasitas Antioksidan Menggunakan DPPH

a.       Pembuatan Larutan Sampel

b.       Analisis

2.       Pengukuran Total Fenol

III.   HASIL

A.      Pengukuran Kapasitas Antioksidan Menggunakan DPPH

1.       Kurva Kapasitas Antioksidan dan Penentuan IC₅₀

a.       Teh Sariwangi (Teh Hitam)

Tabel 1. Hubungan antara konsentrasi teh Sariwangi (teh hitam) dengan absorbansinya

Pengenceran	Konsentrasi Teh (mg/ml)		Absorbansi Sampel	Absorbansi Blanko	Kapasitas Antioksidan (%)
5x	2.0000		0.480	1.515	68.3168
10x	1.0000		0.825	1.515	45.5446
15x	0.6667		1.085	1.515	28.3828
20x	0.5000		1.225	1.515	19.1419
Blanko	0.0000		1.515	1.515	0.0000

Gambar 4. Kurva kapasitas antioksidan pada teh Sariwangi (teh hitam)

Penentuan IC₅₀:

y = 0.5 (A_blanko) = 0.5 (1.515) = 0.7575     →            y              = -0.5194x + 1.4588

                                                                                        0.7575   = -0.5194x + 1.4588

                                                                                                                x              = 1.3502

                                                                                                                IC₅₀         = 1.3502 mg/ml

b.       Teh Sariwangi Celup (Teh Hijau)

Tabel 2. Hubungan antara konsentrasi teh Sariwangi Celup (teh hijau) dengan absorbansinya

Pengenceran	Konsentrasi Teh (mg/ml)	Absorbansi Sampel	Absorbansi Blanko	Kapasitas Antioksidan (%)
5x	2.0000	0.353	1.515	76.6997
10x	1.0000	0.375	1.515	75.2475
15x	0.6667	0.675	1.515	55.4455
20x	0.5000	0.835	1.515	44.8845
Blanko	0.0000	1.515	1.515	0.0000

Gambar 5. Kurva kapasitas antioksidan pada teh Sariwangi Celup (teh hijau)

Penentuan IC₅₀:

y = 0.5 (A_blanko) = 0.5 (1.515) = 0.7575     →            y              = -0.5306x + 1.1927

                                                                                        0.7575   = -0.5306x + 1.1927

                                                                                                                x              = 0.8202

                                                                                                                IC₅₀         = 0.8202 mg/ml

c.        Teh Kepala Jenggot (Teh Hitam)

Tabel 3. Hubungan antara konsentrasi teh Kepala Jenggot (teh hitam) dengan absorbansinya

Pengenceran	Konsentrasi Teh (mg/ml)	Absorbansi Sampel	Absorbansi Blanko	Kapasitas Antioksidan (%)
10x	1.0000	0.318	1.515	79.0099
15x	0.6667	0.514	1.515	66.0726
20x	0.5000	0.915	1.515	39.6040
Blanko	0.0000	1.515	1.515	0.0000

Gambar 6. Kurva kapasitas antioksidan pada teh Kepala Jenggot (teh hitam)

Penentuan IC₅₀:

y = 0.5 (A_blanko) = 0.5 (1.515) = 0.7575     →            y              = -1.2456x + 1.4902

                                                                                        0.7575   = -1.2456x + 1.4902

                                                                                                                x              = 0.5882

                                                                                                                IC₅₀         = 0.5882 mg/ml

d.       Teh Kepala Jenggot (Teh Hijau)

Tabel 4. Hubungan antara konsentrasi teh Kepala Jenggot (teh hijau) dengan absorbansinya

Pengenceran	Konsentrasi Teh (mg/ml)	Absorbansi Sampel	Absorbansi Blanko	Kapasitas Antioksidan (%)
5x	2.0000	0.366	1.515	75.8416
10x	1.0000	0.486	1.515	67.9208
15x	0.6667	0.792	1.515	47.7228
20x	0.5000	0.895	1.515	40.9241
Blanko	0.0000	1.515	1.515	0.0000

Gambar 7. Kurva kapasitas antioksidan pada teh Kepala Jenggot (teh hijau)

Penentuan IC₅₀:

y = 0.5 (A_blanko) = 0.5 (1.515) = 0.7575     →            y              = -0.5332x + 1.2551

                                                                                        0.7575   = -0.5332x + 1.2551

                                                                                                                x              = 0.9332

                                                                                                                IC₅₀         = 0.9332 mg/ml

e.        Teh Sosro Celup (Teh Hitam)

Tabel 5. Hubungan antara konsentrasi teh Sosro Celup (teh hitam) dengan absorbansinya

Pengenceran	Konsentrasi Teh (mg/ml)	Absorbansi Sampel	Absorbansi Blanko	Kapasitas Antioksidan (%)
5x	2	0.348	1.515	77.0297
10x	1	0.510	1.515	66.3366
15x	0.6667	0.830	1.515	45.2145
20x	0.5	1.140	1.515	24.7525

Gambar 8. Kurva kapasitas antioksidan pada teh Sosro Celup (teh hitam)

Penentuan IC₅₀:

y = 0.5 (A_blanko) = 0.5 (1.515) = 0.7575     →            y              = -0.5804x + 1.3523

                                                                                        0.7575   = -0.5804x + 1.3523

                                                                                                                x              = 1.0248

                                                                                                                IC₅₀         = 1.0248 mg/ml

f.        Teh Cap Botol (Teh Hitam)

Tabel 6. Hubungan antara konsentrasi teh Cap Botol (teh hitam) dengan absorbansinya

Pengenceran	Konsentrasi Teh (mg/ml)	Absorbansi Sampel	Absorbansi Blanko	Kapasitas Antioksidan (%)
5x	2.0000	0.460	1.515	69.6370
10x	1.0000	0.675	1.515	55.4455
15x	0.6667	0.935	1.515	38.2838
20x	0.5000	1.125	1.515	25.7426
Blanko	0.0000	1.515	1.515	0.0000

Gambar 9. Kurva kapasitas antioksidan pada teh Cap Botol (teh hitam)

Penentuan IC₅₀:

y = 0.5 (A_blanko) = 0.5 (1.515) = 0.7575     →            y              = -0.5149x + 1.3711

                                                                                        0.7575   = -0.5149x + 1.3711

                                                                                                                x              = 1.1917

                                                                                                                IC₅₀         = 1.1917 mg/ml

2.       Konsentrasi Sampel Teh yang Menghasilkan Penghambatan terhadap Radikal DPPH Sebesar 50%

Tabel 7. Hasil penentuan IC₅₀ pada setiap sampel teh

Sampel Teh	IC50 (mg/ml)
Teh Sariwangi (Teh Hitam)	1.3502
Teh Sariwangi Celup (Teh Hijau)	0.8202
Teh Kepala Jenggot (Teh Hitam)	0.5882
Teh Kepala Jenggot (Teh Hijau)	0.9332
Teh Sosro Celup (Teh Hitam)	1.0248
Teh Cap Botol (Teh Hitam)	1.1917

B.      Pengukuran Total Fenol

1.       Kurva Standar Asam Galat

Tabel 8. Hubungan antara konsentrasi asam galat dengan absorbansinya

Konsentrasi Asam Galat (mg/L)	Absorbansi
0	0.000
50	0.158
100	0.343
150	0.583
200	0.838
250	1.110

Gambar 10. Kurva standar asam galat

2.       Konsentrasi Fenol pada Sampel Teh

Tabel 9. Data absorbansi sampel teh dan penentuan konsentrasi total fenol berdasarkan persamaan yang diperoleh dari kurva standar asam galat

Sampel Teh	Berat Sampel yang Dianalisis (mg)	Absorbansi Sampel	Total Fenol (mg/L)
Teh Sariwangi (Teh Hitam)	50	0.792	188.0000
Teh Sariwangi Celup (Teh Hijau)	100	2.868	649.3333
Teh Kepala Jenggot (Teh Hitam)	50	2.290	520.8889
Teh Kepala Jenggot (Teh Hijau)	100	2.660	603.1111
Teh Sosro Celup (Teh Hitam)	50	0.340	87.5556
Teh Cap Botol (Teh Hitam)	100	1.480	340.8889

Contoh perhitungan:

Sampel Teh Kepala Jenggot (teh hitam)

y = absorbansi sampel = 2.290         →            y              = 0.0045x – 0.0540

                                                                                2.290      = 0.0045x – 0.0540

                                                                                x              = 520.8889 mg/L

                                                                                Total fenol = 520.8889 mg/L

IV.    PEMBAHASAN

Teh merupakan jenis minuman yang digemari oleh masyarakat dan sangat bermanfaat, terbuat dari pucuk tanaman teh (Camellia sinensis) melalui proses pengolahan tertentu. Berdasarkan prosesnya, teh dapat dibagi menjadi tiga jenis, yaitu teh hijau, teh hitam, dan teh oolong. Teh hijau merupakan teh yang berasal dari pucuk daun teh yang sebelumnya mengalami pemanasan dengan uap air untuk menonaktifkan enzim oksidase atau fenolase sehingga oksidasi terhadap katekin dapat dicegah (Hartoyo, 2003). Teh hitam merupakan teh yang berasal dari pucuk daun teh segar yang dibiarkan layu sebelum digulung, kemudian daun-daun tersebut dibiarkan selama beberapa jam sebelum dipanaskan dan dikeringkan. Selama itu, enzim yang terdapat pada daun-daun teh akan mengkatalisis reaksi oksidasi senyawa-senyawa yang ada di dalam teh sehingga menghasilkan warna, rasa, dan aroma. Teh oolong merupakan teh yang dihasilkan melalui proses pemanasan yang dilakukan segera setelah proses rolling (penggulungan daun) dengan tujuan untuk menghentikan proses fermentasi (Hartoyo, 2003).

Teh mengandung berbagai macam komponen aktif yang mempunyai fungsi tertentu di dalam tubuh. Komponen aktif dalam teh yang mempunyai kemampuan antioksidan paling efektif adalah polifenol (Miean dan Mohamed, 2001). Polifenol merupakan komponen bioaktif pada teh yang merupakan kunci utama khasiat teh. Senyawa polifenol dapat berperan sebagai penangkap radikal bebas (antioksidan) hidroksil (OH*) sehingga tidak mengoksidasi lemak, protein, dan DNA dalam sel.

Radikal merupakan senyawa yang bersifat oksidat (mudah mengoksidasi) karena memiliki elektron yang tidak berpasangan sehingga berada dalam bentuk yang tidak stabil. Karena bentuk yang tidak stabil ini, senyawa radikal akan merebut elektron dari senyawa lain seperti asam lemak tidak jenuh pada membran sel (lipid), protein, atau asam nukleat (dapat menyebabkan mutasi gen) yang pada akhirnya dapat menyebabkan timbulnya penyakit-penyakit degeneratif pada manusia. Oleh karena itu, untuk dapat meredam kereaktifan senyawa radikal tersebut, diperlukan senyawa antioksidan, seperti polifenol pada teh, untuk dapat mendonorkan H⁺ kepada senyawa radikal sehingga stabil.

Walaupun ketiga jenis teh yang ada berasal dari tanaman yang sama (Camellia sinensis), terdapat perbedaan yang cukup berarti dalam kandungan polifenolnya (senyawa yang diyakini bermanfaat bagi kesehatan) sehingga kapasitas (aktivitas) antioksidan pada teh pun berbeda-beda. Teh hijau mengandung lebih dari 36% polifenol, sekalipun jumlah ini masih dipengaruhi oleh cuaca (iklim), varietas, jenis tanah, dan tingkat kemasakan (Sibuea, 2003). Teh hijau ini memiliki kandungan polifenol tertinggi, kemudian teh oolong, dan yang terendah adalah teh hitam.

Perbedaan kandungan polifenol pada berbagai jenis teh, terutama dipengaruhi oleh tahapan fermentasi pada saat pengolahannya. Pada awal tahap fermentasi, akan terbentuk theaflavin dan berkurangnya jumlah polifenol (epigalokatekin, epigalokatekin galat, atau epikatekin galat). Pada akhir tahap fermentasi, sebagian theaflavin akan diubah menjadi thearubigin. Komponen polifenol mudah teroksidasi menjadi bentuk lain yang dapat mengurangi kemampuannya sebagai antioksidan.

Pada praktikum kali ini, sampel yang digunakan adalah teh hijau dan teh hitam dari berbagai merek teh, seperti Teh Sariwangi (teh hitam), Teh Sariwangi Celup (teh hijau), Teh Kepala Jenggot (teh hitam), Teh Kepala Jenggot (teh hijau), Teh Sosro Celup (teh hitam), dan Teh Cap Botol (teh hitam). Kemudian setiap sampel teh tersebut akan diukur kapasitas antioksidannya dengan menggunakan DPPH.

Pokorny (2001) menyatakan bahwa pengukuran kapasitas antioksidan menggunakan DPPH (2,2-diphenyl-1-picrylhydrazil atau 1,1-diphenyl-2-picrylhydrazil) merupakan aplikasi dari metode radical-scavenging. Metode tersebut merupakan mekanisme utama dari aktivitas antioksidan dalam makanan. Pengukuran kapasitas antioksidan dengan DPPH merupakan metode untuk mengkaji aktivitas antioksidan menggunakan radikal sintetis dalam larutan organik polar, seperti metanol, pada suhu ruang.

DPPH (2,2-diphenyl-1-picrylhydrazil atau 1,1-diphenyl-2-picrylhydrazil) adalah suatu radikal stabil yang dapat bereaksi dengan radikal lain membentuk suatu senyawa yang stabil atau bereaksi dengan atom hidrogen (yang berasal dari suatu antioksidan) membentuk DPPH tereduksi (DPPH-H). Pada metode ini, DPPH yang telah mencapai keadaan stabil akibat peranan antioksidan yang diujikan, diukur absorbansinya pada panjang gelombang 517 nm. Nilai absorbansi yang terukur akan mengalami penurunan dibandingkan blanko karena adanya reduksi oleh antioksidan (AH) ataupun bereaksi dengan radikal (R^.) dalam mekanisme pemutusan rantai autooksidasi. Berikut ini ialah reaksi yang umum terjadi.

DPPH^.  + AH → DPPH-H + A^.

DPPH^.  + R^.    → DPPH-R

Atau:      DPPH     +                    H                       →                         DPPH-H

(Ungu)            (Antioksidan teh)               (tidak berwarna atau berwarna kuning)

Larutan DPPH berwarna ungu, sedangkan DPPH tereduksi tidak memiliki absorpsi maksimum pada panjang gelombang sinar tampak. Dengan demikian, semakin kuat kapasitas antioksidan suatu senyawa, maka semakin pudar warna ungu yang dihasilkan. Kapasitas antioksidan (%) dapat dihitung dengan rumus:

Kapasitas antioksidan (%) =

Untuk pengukuran kapasitas antioksidan menggunakan DPPH ini, blanko yang digunakan adalah 8 ml metanol.

Reaksi cepat dari DPPH terjadi dengan beberapa jenis senyawa fenolik seperti α-tocopherol, walaupun reaksi sekunder yang lambat masih mungkin terjadi dan mempengaruhi penurunan absorbansi sehingga keadaan steady state hanya dapat dicapai dalam hitungan jam (Pokorny et al., 2001). Oleh karena itu, umumnya laporan mengenai uji kapasitas antioksidan dengan DPPH berisi laporan reaksi oksidasi yang terjadi pada waktu reaksi 10-15 menit. Data tersebut umum disebut dengan istilah IC₅₀ yakni konsentrasi antioksidan yang dibutuhkan untuk menghasilkan penghambatan radikal DPPH sebesar 50%.

Selain itu, untuk memperkirakan total (kapasitas) antioksidan yang berasal dari tanaman (teh), dilakukan pula pengukuran total fenol. Dalam hal ini, fenol digunakan sebagai parameter pengukuran karena fenol merupakan antioksidan utama yang berasal dari tanaman (teh). Senyawa-senyawa fenolik memiliki aktivitas antioksidan karena kemampuannya mendonorkan atom hidrogen dari gugus hidroksilnya kepada senyawa radikal.

Dalam praktikum, digunakan reagen Folin Ciocalteau 50% karena fenol dapat bereaksi dengan Folin membentuk larutan berwarna yang dapat diukur absorbansinya. Semakin tinggi kandungan fenol (jumlah gugus hidroksil fenolik) suatu sampel, maka semakin tinggi pula absorbansinya. Selain itu, digunakan pula Na₂CO₃ 5% untuk menciptakan kondisi basa untuk mendorong terjadinya reaksi antara senyawa fenol dengan reagen Folin Ciocalteau. Prinsip dari metode ini adalah terbentuknya senyawa kompleks berwarna biru yang dapat diukur pada panjang gelombang 725 nm. Warna biru dihasilkan dari reduksi kompleks fosfotungstat-fosfomolibdat yang terdapat dalam pereaksi Folin Ciocalteau oleh senyawa fenol dalam suasana basa.

Penyimpanan campuran larutan di ruang gelap bertujuan untuk mencegah terpaparnya komponen fenol (katekin) oleh cahaya yang dapat menyebabkannya teroksidasi menjadi theaflavin, yang pada akhirnya dapat menyebabkan terjadinya kesalahan negatif pada analisis. Untuk pengukuran total fenol ini, larutan standar yang digunakan adalah asam galat atau  asam 3,4,5-trihidroksibenzoat (C₆H₂(OH)₃CO₂H) dengan variasi konsentrasi 0, 50, 100, 150, 200, dan 250 mg/L. Struktur kimia asam galat adalah sebagai berikut:

Gambar 11. Struktur kimia asam galat (Hernawan dan Setyawan, 2003)

Komponen fenol yang dihitung pada percobaan ini adalah komponen fenol keseluruhan yang terdapat di dalam teh sehingga disebut sebagai total fenol. Analisis dilakukan dengan menggunakan reagen Folin Ciocalteau dan diukur dengan menggunakan spektrofotometer pada panjang gelombang 725 nm. Metode ini didasarkan pada kekuatan reduksi gugus hidroksil fenolik dan sangat tidak spesifik karena tidak membedakan antarjenis komponen fenolik, namun semua jenis fenol dapat dideteksi dengan sensitifitas yang bervariasi.

Berdasarkan data praktikum dan hasil perhitungan pada praktikum pengukuran kapasitas antioksidan menggunakan DPPH, diperoleh bahwa:

Sampel Teh	IC50 (mg/ml)
Teh Sariwangi (Teh Hitam)	1.3502
Teh Sariwangi Celup (Teh Hijau)	0.8202
Teh Kepala Jenggot (Teh Hitam)	0.5882
Teh Kepala Jenggot (Teh Hijau)	0.9332
Teh Sosro Celup (Teh Hitam)	1.0248
Teh Cap Botol (Teh Hitam)	1.1917

Berdasarkan hasil tersebut, terbukti bahwa kapasitas (aktivitas) antioksidan pada teh hijau relatif lebih tinggi dibandingkan dengan kapasitas (aktivitas) antioksidan pada teh hitam. Hal ini dapat dilihat dari nilai IC₅₀ yang relatif lebih rendah pada teh hijau, yaitu 0.8202 (teh Sariwangi Celup) dan 0.9332 (teh Kepala Jenggot) daripada teh hitam, yaitu 1.3502 (teh Sariwangi), 0.5882 (teh Kepala Jenggot), 1.0248 (teh Sosro Celup), dan 1.1917 (teh Cap Botol), yang menunjukkan bahwa teh hijau dengan konsentrasi teh yang lebih rendah daripada teh hitam dapat memberikan efek penghambatan yang sama terhadap radikal DPPH, yaitu sebesar 50%. Hal ini berarti bahwa kapasitas (aktivitas) antioksidan pada teh hijau memang lebih tinggi dibandingkan dengan teh hitam. Ini disebabkan oleh proses fermentasi yang dialami oleh teh hitam yang menyebabkan kandungan senyawa antioksidannya menurun.

Jika dilihat secara keseluruhan, sampel yang memiliki nilai IC₅₀ terendah adalah teh Kepala Jenggot (teh hitam). Hal ini berarti teh Kepala Jenggot (teh hitam) tersebut memiliki kapasitas antioksidan tertinggi. Namun, hal ini tidak sesuai dengan teori, di mana teh hijau memiliki kapasitas antioksidan yang relatif lebih tinggi daripada teh hitam. Hal ini mungkin disebabkan oleh adanya kesalahan yang dilakukan oleh praktikan, yaitu ketidaktelitian praktikan dalam melakukan analisis. Oleh karena itu, kemungkinan data tersebut kurang valid sehingga sampel teh yang diperkirakan memiliki kapasitas antioksidan tertinggi adalah teh Sariwangi Celup (teh hijau).

Berdasarkan data praktikum dan hasil pengukuran pada praktikum pegukuran total fenol, diperoleh bahwa:

Sampel Teh	Berat Sampel yang Dianalisis (mg)	Total Fenol (mg/L)
Teh Sariwangi (Teh Hitam)	50	188.0000
Teh Sariwangi Celup (Teh Hijau)	100	649.3333
Teh Kepala Jenggot (Teh Hitam)	50	520.8889
Teh Kepala Jenggot (Teh Hijau)	100	603.1111
Teh Sosro Celup (Teh Hitam)	50	87.5556
Teh Cap Botol (Teh Hitam)	100	340.8889

Berdasarkan hasil tersebut, jika dilihat dari sampel teh yang beratnya 100 mg (teh Sariwangi Celup (teh hijau), teh Kepala Jenggot (teh hijau), dan teh Cap botol (teh hitam)), terbukti bahwa kandungan fenol pada teh hijau relatif lebih tinggi, yaitu 649.3333 mg/L (teh Sariwangi Celup) dan 603.1111 mg/L (teh Kepala Jenggot) dibandingkan dengan teh hitam, yaitu 340.8889 mg/L (teh Cap Botol). Ini disebabkan pula oleh proses fermentasi yang dialami oleh teh hitam yang mengakibatkan kandungan senyawa antioksidannya (polifenol) menurun. Komponen polifenol ini mudah teroksidasi (difermentasi) menjadi bentuk lain (theaflavin dan thearubigin) sehingga jumlahnya berkurang. Akibatnya, kemampuan senyawa fenol tersebut sebagai antioksidan menjadi berkurang. Oleh karena itu, data ini juga memperkuat data yang diperoleh pada pengukuran kapasitas antioksidan menggunakan DPPH.

Pada sampel teh yang beratnya 50 mg (teh Sariwangi (teh hitam), teh Kepala Jenggot (teh hitam), dan teh Sosro Celup (teh hitam)), terlihat bahwa nilai total fenol di antara ketiga sampel tersebut cukup berbeda jauh (188.0000, 520.8889, dan 87.5556 mg/L) walaupun ketiga teh tersebut tergolong dalam teh yang sama, yaitu teh hitam. Hal ini dapat dipengaruhi oleh cuaca (iklim), varietas, jenis tanah, tingkat kemasakan, dan proses pengolahan yang dialami oleh masing-masing merek teh.

Namun, secara keseluruhan, hasil percobaan ini juga tidak seluruhnya menunjukkan kesesuaian dengan teori yang ada. Hal ini mungkin disebabkan oleh ketidaktelitian praktikan dalam melaksanakan praktikum, seperti kesalahan praktikan saat menggunakan sampel untuk pengukuran total fenol sebesar 100 mg (dua kali dari yang terdapat pada prosedur), namun pereaksi yang digunakan tetap jumlahnya.

V.      KESIMPULAN

Berdasarkan hasil yang diperoleh, dapat disimpulkan bahwa kapasitas (aktivitas) antioksidan pada teh hijau lebih tinggi dibandingkan dengan kapasitas (aktivitas) antioksidan pada teh hitam, yang ditunjukkan oleh nilai IC₅₀ yang relatif lebih rendah pada teh hijau daripada teh hitam, dengan teh Sariwangi Celup (teh hijau) yang memiliki kapasitas antioksidan tertinggi. Hal ini diperkuat pula dengan hasil total fenol pada teh hijau yang juga lebih tinggi dibandingkan dengan teh hitam.

DAFTAR PUSTAKA

Hartoyo, A. 2003. Teh dan Khasiatnya bagi Kesehatan. Kanisius, Yogyakarta.

Hernawan, Udhi Eko dan Ahmad Dwi Setyawan. 2003. Review: Ellagitanin; Biosintesis, Isolasi, dan Aktivitas Biologi. http://www.scribd.com/doc/12814009/f010105 [14 September 2009].

Kochar, S.P. dan B. Rossell. 1990. Detection estimation and evaluation of antioxidants in food system. Di dalam: Hudson, B.J.F., (ed.). Food Antioxidants. Elsivier Applied Science, London.

Kusumaningrum, Dini. 2008. Pemetaan Karakteristik Komponen Polifenol untuk Mencegah Kerusakannya pada Minuman Teh Ready to Drink (RTD). Skripsi. Fateta IPB, Bogor.

Miean, K.H. dan S. Mohamed. 2001. Flavonoid (myricetin, quercetin, kaempferol, luteolin, dan apigenin) content of edible tropical plants. J. of Agricultural and Food Chemistry 49: 3106-3112.

Nelson, J.L., P.S. Bernstein, M.C. Schmidt, M.S. Von Tress, dan E.W. Askew. 2003. Dietary modification and moderate antioxidant supplementation defferently affect serum carotenoids, antioxidants level and marker of oxidative stress in older humans. J. Nutr. 133: 3117-3123.

Pambudi, J. 2004. Potensi Teh sebagai Sumber Zat Gizi dan Perannya dalam Kesehatan. http://www.ipard.com/art_perkebun/Jul04-06_jp.asp [12 September 2009].

Pokorny, J. 2001. Natural antioxidant functionality during food processing. Di dalam: Pokorny, J., N. Yanishlieva, dan M. Gordon, (eds.). Antioxidants in Food: Practical Applications. Woodhead Publ. Ltd., Cambridge, England.

Sharief, Derry Armand. 2006. Optimasi Proses Ekstraksi dan Pengeringan Semprot pada Teh Hijau Instan. Skripsi. Fateta IPB, Bogor.

Sibuea, P. 2003. Minuman Teh dan Khasiatnya bagi Kesehatan. http://www.sinarharapan.co.id/iptek/kesehatan/2004/0528/kes2.html [12 September 2009].

Wuisan, Christine. 2007. Penentuan Kapasitas Antioksidan Rimpang Segar dan Rimpang Bubuk dengan Uji Kadar Polifenol dan Active Oxygen Method (AOM). Skripsi. Fateta IPB, Bogor.